转基因重组酵母乙肝疫苗是一种乙肝表面抗原（HbsAg）亚单位疫苗，它采用转基因的方法将乙肝病毒表达表面抗原的基因进行质粒构建，转入啤酒酵母菌中，通过培养这种重组酵母菌来表达乙肝表面抗原亚单位．转基因酵母的产生过程如图1所示．质粒上有SnaBⅠ、AvrⅡ、SacⅠ、BglⅡ四种限制性酶切割位点，且酶切序列如表所示．请回答：

___上，通过大肠杆菌培养扩增．

（2）构建含抗病基因的重组质粒时，应选用限制性核酸内切酶___（不定项选择）（A．SnaBⅠB．AvrⅡC．SacⅠD．BglⅡ）对含HBsAg基因的DNA和质粒进行切割，切割一个含HBsAg基因的DNA分子需要消耗

___个水分子．

（3）不同的微生物通常需要不同的培养基进行培养，已知酿酒酵母培养基配方为：酵母提取物10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，定容至1L，加入1.5%琼脂粉制成固体培养基．则其灭菌条件应为___．

A．高压蒸汽灭菌法，且温度为121℃，压力为1kg/cm2，灭菌15分钟

B．高压蒸汽灭菌法，且温度为95℃，压力为500g/cm2，灭菌30分钟

C．将配好的培养基放在超净台中，打开紫外灯和过滤风，灭菌30分钟

D．在超净台中，打开过滤风，在酒精灯火焰旁用G6玻璃砂漏斗过滤灭菌

（4）将重组质粒导入酵母菌后，可用___法接种到固体培养基上．某同学在接种后得到如图2所示的菌落分布，推测该同学接种时可能的操作失误是___．若欲利用含卡那霉素的培养基筛选已导入HBsAg基因的酵母菌，则应使重组质粒中含有___作为标记基因，这种培养基属于___培养基．

（5）已知酵母菌的最适培养温度是28℃，在培养时可将培养皿倒置并放入___进行培养．若不倒置培养将导致___．