1.蛋白质的浓度:1j!i-i(V4u)p:V
中性盐沉淀蛋白质时,溶液中蛋白质的实际浓度对分离的效果有较大的影响.通常高浓度的蛋白质用稍低的硫酸铵饱和度即可将其沉淀下来,但若蛋白质浓度过高,则易产生各种蛋白质的共沉淀作用,除杂蛋白的效果会明显下降.对低浓度的蛋白质,要使用更大的硫酸铵饱和度,但共沉淀作用小,分离纯化效果较好,但回收率会降低.通常认为比较适中的蛋白质浓度是2.5%~3.0%,相当于25mg/mL~30mg/mL.
;Y+k3Q)9s)W2.离子强度:)c9S,t+K2[6O(L$K
各种蛋白质的沉淀要求不同的离子强度.-p-Z/b:]%rY
3.盐的性质:6'zE+[/w!s$b'Q+I,v
最有效的盐是多电荷阴离子.
7x1M!^:nd(f.y9H4.PH值:
+x8L8z&e.A9N$`一般说来,蛋白质所带净电荷越多,它的溶解度就越大.改变pH值可改变蛋白质的带电性质,因而就改变了蛋白质的溶解度.远离等电点处溶解度大,在等电点处溶解度小,因此用中性盐沉淀蛋白质时,pH值常选在该蛋白质的等电点附近.-p'N#L1W0@1,x)b3u7u
5.温度:
"T*@3t2R3L除对温度敏感的蛋白质在低温(4度)操作外,一般可在室温中进行.一般温度低蛋白质溶介度降低.但有的蛋白质(如血红蛋白、肌红蛋白、清蛋白)在较高的温度(25度)比0度时溶解度低,更容易盐析.1Z#I6e-f%K$U5O8O
6.蛋白质沉淀后宜在4℃放3小时以上或过夜,以形成较大沉淀而易于分离.盐析时,分子量较小的蛋白质逐步沉淀下来可能就值得怀疑.具体的蛋白需要具体的摸索,当然,对肽来说,结论也是一样的