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【在哺乳动物细胞转染实验中为提高转染效率需要注意哪些问题】
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更新时间:2024-04-27 11:42:55
问题描述:

在哺乳动物细胞转染实验中为提高转染效率需要注意哪些问题

施敏芳回答:
  动物细胞中的高营养需求的培养,通常需要多种氨基酸,维生素,辅酶,核酸,嘌呤,嘧啶,激素和生长因子,其中许多成分行血清,胚胎浸出液来提供,在许多情况下,需要10%胎牛血清或新生小牛.血清是一个很好的营养物质,对细胞的含胎牛血清或新生小牛成长的最佳媒介的绝大部分,但它更困难的来源,这是不确定的成分,使得生长过程中不易察觉的控制.必须被识别,并且仅无菌的,无内毒素的或低溶血溶血,蛋白质和营养物达到使用任何上述血清血清的使用前一定的标准.一些细胞可以生长在无血清培养基中.通过获取适当的方法允许细胞,否则将需要血清适于在无血清培养基中生长.   动物细胞培养的另一个突出的特点,是苛刻的环境条件.所以对于这些严格控制的条件下,可以显著促进经济增长.例如,二倍体成纤维细胞中的pH控制的情况下,比在可变pH值的情况下生长得更好.另一方面,动物细胞生长缓慢,其对环境的影响超过了微生物是大的,所以该混合气体常用空气,氧气,二氧化碳和氧气和氮气进行调整pH值.这不仅增加了训练的成本,而且还控制检测困难的过程.动物细胞培养的问题还需要防止污染,细菌,真菌,病毒或细胞可通过污染的动物细胞培养物引起的.生物组织的材料,操作者本身,培养基,以及各种船只可引起环境污染.显著污染的标志是在pH值的介质中的快速变化,形状模糊,甚至浮动菌落.污染通常指技术操作失误或设备和器具出来的问题,特别是污染小牛血清和组织材料支原体污染更难以对付.   动物细胞培养物,还发现了一个有趣的现象,即大多数哺乳动物细胞必须附加到当细胞覆盖表面之后停止生长附加到固体表面生长的壁,然后,如果去除的细胞的,残留在在细胞表面将沿表面生长并重新覆盖伤口.落入从液体的生长表面上的细胞,通常不再成长逐渐降解,培养这些细胞被称为单层培养壁画.细胞可以胰蛋白酶,酸,碱等试剂或机械处理壁画的文化,使它掉下来的成长表面向下.   基于这些原因,我想液体介质中,以更好地满足培养条件动物细胞呢!当然动物细胞可以与固体支撑基体培养,例如,动物细胞培养最初由科学家进行的,是把一些神经细胞固化在培养的鸡胚胎.
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