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【为了解基因结构,通常选取一特定长度的线性DNA分子,先用一种限制酶切割,通过电泳技术将单酶水解片段分离,计算相对大小;然后再用另一种酶对单酶水解片段进一步降解,分析片段大】
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更新时间:2024-04-27 06:07:51
问题描述:

为了解基因结构,通常选取一特定长度的线性DNA分子,先用一种限制酶切割,通过电泳技术将单酶水解片段分离,计算相对大小;然后再用另一种酶对单酶水解片段进一步降解,分析片段大小.下列是某小组进行的相关实验.

已知一线性DNA序列共有5 000bp(bp为碱基对)A酶切割第一步水解产物分离后,
分别用B酶切割B酶切割将第一步水解产物分离后,
分别用A酶切割1 900 1 000 800 600 500 200
第一步水解产物(单位:bp)第二步水解产物(单位:bp)
2 1001 900 200
1 400800 600
1 0001 000
500500
2 5001 900 600
1 300800 500
1 2001 000 200
经A酶和B酶同时切割
(1)该实验设计主要体现了______原则.

(2)由实验可知,在这段已知序列DNA分子上,A酶和B酶的识别位点分别为______个和______个.

(3)根据表中数据,请在图1中标出相应限制性酶的酶切位点.

(4)已知BamH 与BglⅡ的识别序列及切割位点如图2所示,用这两种酶和DNA连接酶对一段含有数个BamHⅠ和BglⅡ识别序列的DNA分子进行反复的切割、连接操作,若干循环后和______序列明显增多,该过程中DNA连接酶催化______键的形成.

(5)一个基因表达载体的组成除了目的基因外,还必须有______、______及标记基因.

倪乐波回答:
  (1)设计实验的基本原则要有对照实验,.   (2)A酶切割后形成4段,所以有3个识别位点,B酶切割后形成3段,所以有2个切割位点.   (3)由表中酶切割后片段长度可知,1900+600=2500,800+500=1300,1000+200=1200,所以连接如图所示..   (4)图中DNA两片段经酶切后共得到四个片断,切割后形成的黏性末端相同,其中有二个片段组成了已知序列,则另一序列必为剩余的二个片段组成.DNA连接酶催化的是磷酸二酯键.   (5)图中DNA两片段经酶切后共得到四个片断,切割后形成的黏性末端相同,其中有二个片段组成了已知序列,则另一序列必为剩余的二个片段组成.DNA连接酶催化的是磷酸二酯键.   故答案为:   (1)对照(单一变量)   (2)3 2   (3)   (4)磷酸二酯   (5)启动子 终止子
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