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【关于人细胞蛋白提取的问题我在做一个膜蛋白,一条链,但是由二硫键连接.我用的RIPA(强)提取的,在用抗体时,说明书上讲在reducingcondition的状态下可以压出两条带.问题是用RIPA对膜蛋白提取】
2人问答
更新时间:2024-04-22 14:44:39
问题描述:

关于人细胞蛋白提取的问题

我在做一个膜蛋白,一条链,但是由二硫键连接.我用的RIPA(强)提取的,在用抗体时,说明书上讲在reducingcondition的状态下可以压出两条带.问题是用RIPA对膜蛋白提取率如何?二是,什么是reducingcondition?RIPA提取的protein是什么状态?谢谢了

提蛋白做westernblot用

林兰芬回答:
  既然只是做western的就不用这么麻烦,我通常是用RIPA、PMSF、磷酸酶抑制剂(视情况加)裂解细胞离心后,收集上清,加入loading沸水煮15min,然后直接做western.   reducingcondition:就是还原状态,二硫键被打开时,蛋白恢复成链状态,而不是缠绕成高级结构,用RIPA提取时,部分蛋白被还原,由于还原和非还原两种状态即跑出两条带,如果所用的抗体是结合在非缠绕部分,结果曝光即会出现两条相邻的带
陈良宽回答:
  我提的是一种跨膜蛋白,胞外区有一个二硫键,RIPA对膜蛋白提取率怎么样?我是曝出了相邻的两条带,但是还原态和非还原态分子量会有差异吗,ripa提蛋白能不能做到都是还原态?现在曝出的条带好几条,很纠结,根本没法分析。
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