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关于质粒亚克隆的一些问题有一个以前师兄留下来的质粒,不知道是什么载体的,只知道是HA标签,现在因为想用它做GST-pulldown,所以要把质粒克隆到GST载体上,预计是使用两种酶进行双酶切,本人
3人问答
更新时间:2024-05-04 12:49:31
问题描述:

关于质粒亚克隆的一些问题

有一个以前师兄留下来的质粒,不知道是什么载体的,只知道是HA标签,现在因为想用它做GST-pulldown,所以要把质粒克隆到GST载体上,预计是使用两种酶进行双酶切,本人几乎没怎么做过克隆,所以想请教一下,具体细节步骤应该要怎么做?

PS:需要设计引物先PCR再酶切?还是用选定的两种酶直接把原质粒来进行酶切?

林金星回答:
  一般实验室常用的载体,都是用固定的常用双酶切切割后将基因连进去的,所以你可以资讯师兄是用什么内切酶位点构建的.
陈德福回答:
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林金星回答:
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