科学家将外源目的基因与大肠杆菌的质粒进行重组,并在大肠杆菌中成功表达.如图表示构建重组质粒和筛选含目的基因的大肠杆菌的过程.请据图回答:
(1)步骤①和②中常用的工具酶是___和___.
(2)图中质粒上有抗氨苄青霉素和抗四环素两个标记基因,经过①和②步骤后,有些质粒上的___基因内插入了外源目的基因,形成重组质粒,由于目的基因的分隔使得该抗性基因失活.
(3)步骤③是___的过程,为了促进该过程,应该用___处理大肠杆菌.
(4)步骤④:将三角瓶内的大肠杆菌接种到含四环素的培养基C上培养,目的是筛选___,能在C中生长的大肠杆菌有___类.
(5)步骤⑤:用无菌牙签挑取C上的单个菌落,分别接种到D(含氨苄青霉素和四环素)和E(含四环素)两个培养基的相同位置上,一段时间后,菌落的生长状况如图所示.含目的基因的菌落位于___(D、E)上,请在图中相应的位置上圈出来.___.
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