一、流动相的PH应在使用的范围内 　　Welch公司的色谱柱除反相氰基柱PH1.5-9.0外,其反相色谱柱的PH范围均为1.5-10,由于填料中存在Si-C和Si-O键,流动相超过其PH范围将会导致硅胶基质流失和键合相碳链断裂,使柱效下降,使用寿命变短.由于流动相的PH控制不当而对色谱柱造成的损害,通常很难是色谱柱恢复,因此必须认真对待,严格控制流动相的PH值. 　　二、去除样品和流动相中的固体颗粒 　　样品和流动相中含有的固体颗粒物质会堵塞色谱柱筛板,筛板被堵住不仅会引起柱压的升高,而且也会引起柱效下降,因为筛板的堵塞会引起液流不均,导致色谱峰型拖尾、变宽,从而使柱效下降.因此,建议使用超纯水和色谱纯试剂,在分析样品前对样品进行针筒过滤,流动相过0.45μm滤膜. 　　三、使用保护柱或在线过滤器 　　样品和流动相经过滤后并不能完全消除固体颗粒物质,因为泵的磨损、密封圈和管路的老化也会产生固体颗粒物质,这些固体颗粒被流动相带入色谱柱,堵塞筛板,导致柱压升高、柱效下降.保护柱和在线过滤器上都有筛板,其孔径与色谱柱孔径相同,因此可以阻止固体颗粒物质到达色谱柱,有效防止色谱柱筛板的堵塞.由于柱压升高在分析故障中占很大比例,因此,除对样品和流动相进行过滤外,建议您在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器. 　　如果去人色谱柱柱压升高是由于进样端筛板被堵引起的,科选择一下方式进行补救： 　　1、先在色谱柱前加上保护柱或在线过滤器,然后用甲醇、水=20/80ml/min反向冲色谱柱180min. 　　2、先在色谱柱进样端加上保护柱或在线过滤器,然后反向使用. 　　四、正确使用缓冲盐 　　缓冲盐通常易溶于水,难溶于有机溶剂,因此缓冲盐使用不当会使其析出,堵塞填料基质上的微孔和颗粒间的空隙,使填料板结,柱压上升；同时阻碍了基质上键合的碳链自由舒展,使色谱柱的保留能力下降,柱效降低.缓冲盐析出后,去除非常困难,因此,正确的使用缓冲盐对延长色谱柱使用寿命非常重要. 　　正确使用缓冲盐的目的是防止缓冲盐析出,因此正确使用缓冲盐的方法可归结为一句话：使用前要过滤,使用后要冲洗.具体方法如下： 　　1、等度条件：使用缓冲盐前和使用后需用过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min；使用后去除缓冲盐的另一个方法是用过渡流动相以0.2ml/min流速冲洗色谱柱过夜. 　　2、梯度条件：用含有缓冲盐的流动相跑梯度之前,用与初始流动相组成相同的过渡流动相以1.0ml/min流速冲洗60min,再用该过渡流动相以1.0ml/min冲洗色谱柱120min.含缓冲盐流动相的梯度设定应尽量平缓,以避免梯度过程中缓冲盐析出. 　　注意：过渡流动相是指有机相和水相的组成与分析流动相相同,区别只是过渡流动相不含缓冲盐. 　　3、缓冲盐析出的补救方法： 　　1）方案1：用甲醇/20/80以1.0ml/min流速35摄氏度条件下反向冲洗色谱柱120min 　　2）方案2：用甲醇/水=20/80以0.2ml/min流速反向冲洗色谱柱过夜. 　　五、防止强保留物质在色谱柱上存留 　　强保留物质和大分子化合物在色谱柱中累积,对样品中的化合物产生额外的保留行为,不仅引起峰型变宽、拖尾,使柱效下降,同时也会引起保留时间的变化,累积到一定程度时还会导致柱压升高.由于强保留物质和大分子化合物对色谱分离的影响是一个累积效应,需要一定的时间才会体现出来,但对许多药品特别是复杂样品而言,很难判断其是否是含有强保留物质,因此要防止强保留物质的累积,需要在每天的日常维护中用纯甲醇或乙氰清洗色谱柱. 　　清洗方法： 　　1、未使用缓冲盐：每天分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后再用甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min. 　　2、使用过缓冲盐：分析完成后,先用上述方法除去缓冲盐,然后在用纯甲醇或乙氰反向冲洗色谱柱60min 　　3、补救方法： 　　水——乙氰——氯仿（或异丙醇）——乙氰——水 　　每一步以1.0ml/min流速反向冲洗色谱柱60min.